中考生物知識點分析(3)

　　8.植物體細胞雜交的過程是怎樣的？

　　體細胞雜交是克服植物有性雜交不親和性、打破物種之間的生殖隔離、擴大遺傳重組范圍的一種手段。操作過程包括：原生質體制備、原生質體融合、雜種細胞篩選、雜種細胞培養(yǎng)、雜種植株再生以及雜種植株鑒定等步驟。

　　原生質體制備是用纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶將植物細胞壁分解掉，只留下細胞膜（質膜）包裹著細胞內含物。原生質體融合是指兩個原生質體的質膜重新組合排列形成一個質膜，其中含有兩個細胞核。在細胞工程中一般是誘導融合，形成的融合細胞中所含有的兩個細胞核是來自不同的物種，稱之為異核體（heterokaryon）。誘導融合的手段有化學誘導和物理誘導。在誘導因素的作用下形成的融合細胞進一步產生核融合，進行第一次有絲分裂。雜種細胞的篩選方法有：①細胞系互補的選擇方法，包括葉綠素缺失互補、營養(yǎng)缺陷互補和抗性互補等；②利用物理特異性差異的選擇方法：這是利用兩個原生質體物理特異性差異的一種選擇，包括原生質體的大小、顏色、浮密度等的不同來選擇；③利用生長特異性差異的選擇方法。需要注意的是上述選擇方法只適合部分雜交細胞的情況，有時無法選擇，就不加選擇地進行培養(yǎng)和再生成植株，然后對再生植株的雜種性狀進行鑒定。雜種細胞培養(yǎng)方法與原生質體的培養(yǎng)方法相似。體細胞雜種的鑒定方法有：①形態(tài)學鑒定。利用雜種植株與雙親在表現(xiàn)型上的差異進行比較分析，如葉片大小與形狀，花的形狀與顏色、葉脈、葉柄、花梗及表皮毛有無等；②細胞學鑒定。雜種植株細胞中的染色體數(shù)目是否比任何一方親本細胞中的染色體數(shù)目增多？理論上講如果染色體不丟失，雜種細胞中染色體數(shù)目應為雙親染色體數(shù)目之和。也可以用基因組原位雜交的分子細胞學方法進行鑒定；③同功酶鑒定。同功酶是功能相同的酶的多重分子形態(tài)，它們是特異基因的產物。雜種細胞中的同功酶譜一般是雙親酶譜之和，但有時也會出現(xiàn)雙親沒有的新帶；④分子生物學鑒定。常用的方法有限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）、隨機擴增多態(tài)性（RAPD）和擴增片段長度多態(tài)性（AFLP）等。

　　值得注意的是體細胞雜交尚存在一些問題：①親緣關系越遠，染色體排斥丟失的現(xiàn)象就越嚴重；②由于是兩個物種的全部遺傳物質的合并，各種基因都在其中，選擇符合需要的個體難度大；③有時缺乏選擇雜種細胞的有效方法。因此目前整體對稱融合的工作比較少，而是采用非對稱融合，即一方親本包括了全部遺傳物質，另一方親本只取一部分遺傳物質，如用不具有核的原生質體與之進行融合。

　　9.物理和化學方法誘導原生質體融合的基本原理是什么？

　　化學融合的機制：常用化學融合方法有高pH—高Ca2+法和聚乙二醇（PEG）法。高pH—高Ca2+法誘導原生質體融合的基本原理是中和原生質體表面所帶的電荷，使原生質體的質膜緊密接觸，從而有利于質膜的接觸融合。PEG處理原生質體可以使原生質體聚集促進融合，但PEG誘導融合的真正機制目前并不清楚。

　　物理融合的機制：常用方法為電融合法。此法是先將兩種原生質體以適當?shù)谋壤�混合成懸浮液，將其滴入電融合小室中，給小室兩極以交變電流，使原生質體沿電場方向排列成串珠狀，接著給以瞬間高強度的電脈沖，使原生質體膜產生局部破損而導致融合。

　　10.工廠化生產人參皂甙的基本過程是什么？

　　第一步，選擇人參根作為外植體進行培養(yǎng)，產生愈傷組織，經過培養(yǎng)選擇找到增殖速度快而且細胞內人參皂甙含量高的細胞株作為種質，其中一部分作為保存用，以備下一次生產用，一部分進行發(fā)酵生產。

　　第二步，將第一步選擇到的細胞株在發(fā)酵罐中的適合培養(yǎng)液中進行液體培養(yǎng)，增加細胞數(shù)量。

　　第三步，將發(fā)酵罐中培養(yǎng)的細胞進行破碎，從中提取人參皂甙。

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